Nature.com сайтына киргениңиз үчүн рахмат. Сиз колдонуп жаткан серепчинин версиясы чектелген CSS колдоосуна ээ. Мыкты натыйжалар үчүн биз жаңыраак браузерди колдонууну сунуштайбыз (же Internet Explorerде шайкештик режимин өчүрүү). Ошол эле учурда, колдоо үзгүлтүксүз камсыз кылуу үчүн, биз стилдер жана JavaScript жок сайтты көрсөтөт.
Модикалык өзгөрүүнүн жаныбарлар моделдерин түзүү (МК) МКны изилдөө үчүн маанилүү негиз болуп саналат. Элүү төрт Жаңы Зеландиянын ак коёндору жасалма операция тобуна, булчуңдарды имплантациялоо тобуна (ME тобу) жана ядро пульпосу имплантация тобуна (NPE тобу) бөлүнгөн. NPE тобунда омуртка аралык диск anterolateral бел хирургиялык ыкма менен ачыкка чыгып, ийне L5 омуртка денесин аягы пластинкага жакын теши үчүн колдонулган. NP шприц менен L1/2 омуртка аралык дискинен алынган жана ага сайылган. Субхондралдык сөөккө тешик ачуу. Булчуңдарды имплантациялоо тобунда жана жасалма операция тобунда хирургиялык жол-жоболор жана бургулоо ыкмалары NP имплантация тобундагыдай эле. ME тобунда булчуңдун бир бөлүгү тешикке салынса, жасалма операция тобунда тешикке эч нерсе салынган эмес. Операциядан кийин MRI сканерлөө жана молекулярдык биологиялык тесттер жүргүзүлдү. NPE тобунда сигнал өзгөрдү, бирок жасалма операция тобунда жана ME тобунда ачык сигнал өзгөргөн жок. Гистологиялык байкоо имплантация болгон жерде анормалдуу кыртыштын пролиферациясы байкалганын жана NPE тобунда IL-4, IL-17 жана IFN-γ экспрессиясы көбөйгөнүн көрсөттү. Subchondral сөөккө NP имплантациялоо MC мал моделин түзө алат.
Модик өзгөрүүлөр (MC) магниттик-резонанстык томографияда (МРТ) көрүнгөн омурткалардын акыркы пластинкаларынын жана чектеш жилик чучугунун жабыркашы болуп саналат. Алар тиешелүү симптомдору бар адамдарда кеңири таралган1. Көптөгөн изилдөөлөр улам белдин оорушун (LBP) 2,3 менен байланышы үчүн MC маанилүүлүгүн баса белгилешти. де Roos et al.4 жана Modic et al.5 өз алдынча биринчи омуртка жилик чучугунда subchondral сигнал аномалиялардын үч ар кандай түрлөрүн сүрөттөгөн. I типтеги модикалык өзгөрүүлөр T1-салмактуу (T1W) ырааттуулугунда гипоинтенстүү жана T2-салмактуу (T2W) ырааттуулугунда гиперинтенстүү. Бул жарака жилик чучугунда жарака акыркы пластинкаларын жана чектеш кан тамыр грануляциялык ткандарды көрсөтөт. II типтеги модикалык өзгөрүүлөр T1W жана T2W ырааттуулугунда жогорку сигналды көрсөтөт. Бул түрдөгү жабыркоодо endplate деструкциясы, ошондой эле чектеш жилик чучугунун гистологиялык майлуу ордун табууга болот. Модик типтеги III өзгөрүүлөр T1W жана T2W ырааттуулугунда төмөн сигналды көрсөтөт. Соңку пластинкаларга туура келген склеротикалык жаралар байкалган6. MC Омуртканын патологиялык оорусу болуп эсептелет жана омуртканын7,8,9 көптөгөн дегенеративдик оорулары менен тыгыз байланышта.
Колдо болгон маалыматтарды эске алуу менен, бир нече изилдөөлөр МКнын этиологиясы жана патологиялык механизмдери жөнүндө толук түшүнүктөрдү берген. Альберт жана башкалар. MC диск грыжа менен шартталган болушу мүмкүн деп божомолдошот8. Ху жана башкалар. MC катуу диск бузулушуна 10 таандык. Крок «ички дисктин жарылуусу» деген концепцияны сунуш кылган, анда дисктин кайталануучу травмасы акыркы пластинкадагы микрокөздөрдүн жыртылышына алып келиши мүмкүн. Жарык пайда болгондон кийин, ядронун pulposus (NP) тарабынан endplate бузулушу, андан ары MC11 өнүгүшүнө алып келет, аутоиммундук жооп түрткү болушу мүмкүн. Ма жана башкалар. окшош көз караш менен бөлүштү жана NP менен шартталган аутоиммунитет MC12 патогенезинде негизги ролду ойнойт деп билдирди.
Иммундук системанын клеткалары, өзгөчө CD4+ Т жардамчы лимфоциттери аутоиммунитеттин патогенезинде маанилүү роль ойношот13. Жакында ачылган Th17 чакан тобу IL-17 сезгенүүчү цитокинди өндүрөт, химокиндин экспрессиясына көмөктөшөт жана IFN-γ14 өндүрүү үчүн жабыркаган органдардагы Т-клеткаларды стимулдайт. Th2 клеткалары иммундук жооптордун патогенезинде да өзгөчө роль ойнойт. IL-4 өкүлү Th2 клеткасы катары экспрессия оор иммунопатологиялык кесепеттерге алып келиши мүмкүн15.
MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 боюнча көптөгөн клиникалык изилдөөлөр жүргүзүлгөнү менен, адамдарда көп кездешүүчү MC процессин туурай турган ылайыктуу жаныбарлардын эксперименталдык моделдери дагы эле жетишсиз. этиологиясын изилдөө үчүн же максаттуу терапия сыяктуу жаңы дарылоо үчүн колдонулат. Бүгүнкү күнгө чейин, негизги патологиялык механизмдерин изилдөө үчүн MC бир нече жаныбар моделдери гана билдирилди.
Альберт жана Ма тарабынан сунушталган аутоиммундук теориянын негизинде, бул изилдөө бургуланган омуртка аягы пластинкасынын жанында NPди автотрансплантациялоо менен жөнөкөй жана кайталануучу коёндун MC моделин түздү. Башка максаттар жаныбарлар моделдеринин гистологиялык мүнөздөмөлөрүн байкоо жана МК өнүктүрүүдө НПнын конкреттүү механизмдерин баалоо болуп саналат. Бул максатта, биз, мисалы, MC прогрессти изилдөө үчүн молекулярдык биология, MRI жана гистологиялык изилдөөлөр сыяктуу ыкмаларды колдонобуз.
Эки коён операция маалында кан кетип, төрт коён МРТ учурунда наркоздон өлгөн. Калган 48 коён аман калып, операциядан кийин жүрүм-туруму жана неврологиялык белгилери байкалган эмес.
MRI ар кандай тешиктерге камтылган кыртыштын сигнал интенсивдүүлүгү ар кандай экенин көрсөтүп турат. NPE тобундагы L5 омуртка денесинин сигнал интенсивдүүлүгү киргизилгенден кийин 12, 16 жана 20 жумада акырындык менен өзгөрдү (T1W ырааттуулугу төмөн сигналды көрсөттү, ал эми T2W ырааттуулугу аралаш сигнал плюс аз сигналды көрсөттү) (сүрөт. 1C), ал эми MRI көрүнүшү башка эки топтун кыстарылган бөлүктөрүнүн ошол эле мезгилде салыштырмалуу туруктуу бойдон калган (сүрөт 1A, B).
(A) 3 убакыт пункттарында коёндун бел омурткасынын өкүлү ырааттуу MRIs. Жасалма операция тобунун сүрөттөрүндө эч кандай сигналдык аномалиялар табылган жок. (B) ME тобунун омуртка денесинин сигнал мүнөздөмөлөрү жасалма операция тобуна окшош жана убакыттын өтүшү менен кыстаруу сайтында олуттуу сигнал өзгөрүүсү байкалган эмес. (C) NPE тобунда төмөн сигнал T1W ырааттуулугунда ачык көрүнүп турат, ал эми аралаш сигнал жана төмөн сигнал T2W ырааттуулугунда ачык көрүнүп турат. 12-жума мезгилден 20-жума мезгилге чейин, T2W ырааттуулугунда төмөн сигналдарды курчап турган спорадик жогорку сигналдар азаят.
Ачык сөөк гиперплазиясын NPE тобунда омуртка денесинин имплантациялоочу жеринен көрүүгө болот, ал эми сөөк гиперплазиясы NPE тобуна салыштырмалуу 12-20 жумага чейин тезирээк пайда болот (2С-сүрөт), моделделген омурткада олуттуу өзгөрүү байкалбайт. органдар; Шам тобу жана ME тобу (2С-сүрөт) 2A,B).
А) Имплантацияланган бөлүгүндө омуртка денесинин бети абдан жылмакай, тешик жакшы айыгат, омуртка денесинде гиперплазия жок. (B) ME тобунда имплантацияланган сайттын формасы жасалма операция тобуна окшош жана убакыттын өтүшү менен имплантацияланган сайттын көрүнүшүндө эч кандай ачык өзгөрүү жок. (C) Сөөктүн гиперплазиясы NPE тобунда имплантацияланган жерде пайда болгон. Сөөктүн гиперплазиясы тездик менен көбөйүп, ал тургай, омуртка аралык диск аркылуу карама-каршы омуртка органына чейин созулган.
Гистологиялык анализ сөөктүн пайда болушу жөнүндө көбүрөөк маалымат берет. 3-сүрөттө H&E менен боёлгон операциядан кийинки бөлүмдөрдүн сүрөттөрү көрсөтүлгөн. Жасалма операция тобундагы хондроциттер жакшы жайгашып, клетканын көбөйүүсү байкалган эмес (3А-сурет). ME тобундагы абал жасалма операция тобундагы абалга окшош болгон (сүрөт 3B). Бирок NPE тобунда имплантация болгон жерде көп сандагы хондроцит жана NP сымал клеткалардын көбөйүшү байкалган (3С-сүрөт);
(A) Аяккы пластинкага жакын жерде трабекулаларды көрүүгө болот, хондроциттер клетканын көлөмү жана формасы бирдей жана көбөйбөйт (40 жолу). (B) ME тобундагы имплантация сайтынын абалы жасалма топтун абалына окшош. Трабекулалар жана хондроциттер көрүүгө болот, бирок имплантация болгон жерде ачык көбөйүү байкалбайт (40 жолу). (B) Хондроциттер жана NP сымал клеткалар кыйла көбөйүп, хондроциттердин формасы жана өлчөмү бирдей эмес (40 эсе) экенин көрүүгө болот.
NPE жана ME топторунда интерлейкин 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA жана interferon γ (IFN-γ) mRNA экспрессиясы байкалган. Максаттуу гендердин экспрессия деңгээли салыштырылганда, IL-4, IL-17 жана IFN-γ генинин экспрессиялары NPE тобунда ME тобуна жана жасалма операция тобуна салыштырмалуу бир топ жогорулаган (4-сүрөт). (P <0,05). Жасалма операция тобу менен салыштырганда, ME тобунда IL-4, IL-17 жана IFN-γ экспрессиялары бир аз гана жогорулап, статистикалык өзгөрүүгө жеткен жок (P> 0.05).
NPE тобунда IL-4, IL-17 жана IFN-γ нын mRNA экспрессиясы жасалма операция тобуна жана ME тобуна (P <0.05) караганда бир кыйла жогору тенденцияны көрсөттү.
Ал эми, ME тобунда сөз деъгээлдери эч кандай олуттуу айырма (P> 0.05) көрсөткөн.
Western blot анализи IL-4 жана IL-17ге каршы коммерциялык жеткиликтүү антителолордун жардамы менен өзгөртүлгөн mRNA экспрессия үлгүсүн ырастоо үчүн жүргүзүлгөн. Сүрөттөр 5A, B көрсөтүлгөндөй, ME тобу жана жасалма операция тобу менен салыштырганда, NPE тобунда IL-4 жана IL-17 протеин деңгээли бир кыйла жогорулаган (P <0.05). Жасалма операция тобу менен салыштырганда, ME тобунда IL-4 жана IL-17 протеининин деңгээли да статистикалык маанилүү өзгөрүүлөргө жете алган жок (P> 0.05).
(A) NPE тобундагы IL-4 жана IL-17 протеиндин деңгээли ME тобуна жана плацебо тобуна караганда бир кыйла жогору болгон (P <0.05). (B) Western blot гистограммасы.
Улам хирургиялык учурунда алынган адам үлгүлөрүнүн саны чектелген, MC патогенези боюнча так жана деталдуу изилдөөлөр бир аз кыйынга турат. Биз анын потенциалдуу патологиялык механизмдерин изилдөө үчүн МКнын жаныбар моделин түзүүгө аракет кылдык. Ошол эле учурда, радиологиялык баалоо, гистологиялык баалоо жана молекулярдык биологиялык баалоо NP автотранспланты тарабынан индукцияланган МК курсун байкоо үчүн колдонулган. Натыйжада, NP имплантация модели 12 жумадан 20 жумалык убакыт чекиттерине чейин сигналдын интенсивдүүлүгүнүн акырындык менен өзгөрүшүнө алып келди (T1W ырааттуулугунда аралаш төмөн сигнал жана T2W ырааттуулугунда аз сигнал), ткандардын өзгөрүшүн жана гистологиялык жана молекулярдык биологиялык баалоо радиологиялык изилдөөнүн натыйжаларын тастыктады.
Бул эксперименттин натыйжалары визуалдык жана гистологиялык өзгөрүүлөр NPE тобундагы омуртка денеси бузулган жерде пайда болгонун көрсөтүп турат. Ошол эле учурда IL-4, IL-17 жана IFN-γ гендердин, ошондой эле IL-4, IL-17 жана IFN-γ экспрессиясы байкалган, бул омурткадагы пульпоздук ткандардын аутологиялык ядросунун бузулгандыгын көрсөтөт. дене бир катар сигналдык жана морфологиялык өзгөрүүлөрдү алып келиши мүмкүн. Жаныбар моделинин омуртка денелеринин сигналдык мүнөздөмөлөрү (T1W ырааттуулугунда төмөн сигнал, T2W ырааттуулугунда аралаш сигнал жана төмөн сигнал) адамдын омуртка клеткаларына абдан окшош экендигин табуу оңой, жана MRI мүнөздөмөлөрү да гистология жана одоно анатомия байкоолорду ырастоо, башкача айтканда, омурткалардын дене клеткаларындагы өзгөрүүлөр прогрессивдүү болуп саналат. Курч травмадан келип чыккан сезгенүү реакциясы пункциядан кийин көп өтпөй пайда болушу мүмкүн болсо да, MRI натыйжалары бара-бара күчөгөн сигналдык өзгөрүүлөр пункциядан кийин 12 жумадан кийин пайда болуп, 20 жумага чейин сакталып турганын көрсөттү. Бул жыйынтыктар autologous омуртка NP коёндордо прогрессивдүү MV түзүү үчүн ишенимдүү ыкма экенин көрсөтүп турат.
Бул пункция модели адекваттуу чеберчиликти, убакытты жана хирургиялык күчтү талап кылат. Алдын ала эксперименттерде паравертебралдык байламталардын бөлүнүшү же ашыкча стимулдалышы омуртка остеофиттеринин пайда болушуна алып келиши мүмкүн. Жанындагы дисктерге зыян келтирбөө жана дүүлүктүрүү үчүн кам көрүү керек. Кирүү тереңдигин ырааттуу жана кайталануучу натыйжаларды алуу үчүн көзөмөлдөө керек болгондуктан, биз кол менен 3 мм узундуктагы ийненин кабыгын кесип, тығынды жасадык. Бул тыгынды колдонуу омуртка денесинде бирдей бургулоо тереңдигин камсыз кылат. Алдын ала эксперименттерде операцияга катышкан үч ортопедиялык хирург 16 калибрдеги ийнелер менен иштөө 18 калибрдеги ийнелер же башка ыкмаларга караганда жеңилирээк экенин аныкташкан. Бургулоо учурунда ашыкча кан агууну болтурбоо үчүн ийнени бир аз кыймылдатпай кармап туруу ылайыктуураак киргизүү тешигин камсыздайт, бул МКнын белгилүү бир даражасын ушундай жол менен башкарууга болорун билдирет.
Көптөгөн изилдөөлөр MC багытталган болсо да, аз MC25,26,27 этиологиясы жана патогенези жөнүндө белгилүү. Биздин мурунку изилдөөлөрдүн негизинде, биз аутоиммунитет MC12 пайда болушунда жана өнүгүшүндө негизги ролду ойнойт деп табылган. Бул изилдөө антигенди стимулдоодон кийин CD4+ клеткаларынын негизги дифференциациялоо жолдору болгон IL-4, IL-17 жана IFN-γ сандык экспрессиясын изилдеген. Биздин изилдөөбүздө, терс топ менен салыштырганда, NPE тобу IL-4, IL-17 жана IFN-γ жогору экспрессияга ээ болгон жана IL-4 жана IL-17 протеиндин деңгээли да жогору болгон.
Клиникалык жактан, IL-17 мРНК экспрессиясы диск herniation28 менен ооруган NP клеткаларында көбөйөт. IL-4 жана IFN-γ экспрессиясынын деңгээлинин жогорулашы дени сак controls29 менен салыштырганда курч эмес кысуу диск грыжа моделинде табылган. IL-17 сезгенүү, ткандардын жаракат аутоиммундук ооруларда30 негизги ролду ойнойт жана IFN-γ31 үчүн иммундук жооп күчөтөт. MRL/lpr чычкандарында32 жана аутоиммунитетке сезгич чычкандарда33 өркүндөтүлгөн IL-17 ортомчу кыртыш жаракаттары билдирилди. IL-4 сезгенүүгө каршы цитокиндердин (мисалы, IL-1β жана TNFα сыяктуу) жана макрофагдын активдешүүсүнө бөгөт коё алат. Бул IL-4 mRNA туюнтма бир эле убакта IL-17 жана IFN-γ салыштырганда NPE тобунда ар түрдүү болгон деп билдирди; NPE тобунда IFN-γнун mRNA экспрессиясы башка топторго караганда бир кыйла жогору болгон. Демек, IFN-γ өндүрүшү NP интеркалациясынан келип чыккан сезгенүү реакциясынын ортомчусу болушу мүмкүн. Изилдөөлөр көрсөткөндөй, IFN-γ бир нече клетка түрлөрү, анын ичинде активдештирилген 1 жардамчы Т-клеткалар, табигый өлтүргүч клеткалар жана макрофагдар35,36 жана иммундук жоопторду37 өбөлгөлөөчү сезгенүүгө каршы негизги цитокин болуп саналат.
Бул изилдөө аутоиммундук жооп MC пайда болушуна жана өнүгүшүнө тартылышы мүмкүн экенин көрсөтүп турат. Луома жана башкалар. MC жана көрүнүктүү НПнын сигналдык мүнөздөмөлөрү MRIде окшош экенин жана экөө тең T2W ырааттуулугунда жогорку сигналды көрсөтөөрүн аныкташкан38. Кээ бир цитокиндер, мисалы, IL-139 сыяктуу MC пайда болушу менен тыгыз байланышта экени тастыкталган. Ма жана башкалар. НПнын өйдө же ылдый чыгышы MC12нин пайда болушуна жана өнүгүшүнө чоң таасирин тийгизиши мүмкүн деп сунуштады. Bobechko40 жана Herzbein et al.41 NP төрөлгөндөн тартып кан тамыр жүгүртүүгө кире албайт иммунотолеранттык кыртыш экенин билдирди. NP протрузиялары бөтөн денелерди кан менен камсыздоого киргизип, жергиликтүү аутоиммундук реакцияларга ортомчулук кылат42. Аутоиммундук реакциялар көп сандагы иммундук факторлорду жаратышы мүмкүн жана бул факторлор кыртыштарга үзгүлтүксүз таасир эткенде сигнализациянын өзгөрүшүнө алып келиши мүмкүн43. Бул изилдөөдө IL-4, IL-17 жана IFN-γ ашыкча экспрессиясы типтүү иммундук факторлор болуп саналат, бул дагы NP менен MCs44 ортосундагы тыгыз байланышты далилдейт. Бул жаныбар модели NP ачылышын жана акыркы пластинкага киришин туурайт. Бул жараян андан ары MC боюнча аутоиммунитет таасирин ачып берди.
Күтүлгөндөй, бул жаныбар модели MC изилдөө үчүн мүмкүн болгон аянтча менен камсыз кылат. Бирок, бул модель дагы эле кээ бир чектөөлөргө ээ: биринчиден, жаныбарларды байкоо баскычында, кээ бир орто баскычтагы коёндорду гистологиялык жана молекулярдык биологияны текшерүү үчүн эвтанизациялоо керек, ошондуктан кээ бир жаныбарлар убакыттын өтүшү менен "колдонулбай калат". Экинчиден, бул изилдөөдө үч убакыт чекити коюлганы менен, тилекке каршы, биз МКнын бир түрүн гана моделдедик (Modic түрү I өзгөрөт), андыктан адамдын оорусунун өнүгүү процессин көрсөтүү жетишсиз, жана убакыттын көлөмүн аныктоо үчүн дагы көп чекиттер коюлушу керек. жакшыраак бардык сигнал өзгөрүүлөрдү байкоо. Үчүнчүдөн, кыртыш структурасындагы өзгөрүүлөр, чынында эле, гистологиялык боёо менен ачык-айкын көрсөтүлүшү мүмкүн, бирок кээ бир адистештирилген ыкмалары бул моделдин микроструктуралык өзгөрүүлөрдү жакшыраак ачып бере алат. Мисалы, поляризацияланган жарык микроскопиясы коёндун омуртка аралык дисктериндеги фиброкартилддердин пайда болушун талдоо үчүн колдонулган45. MC жана endplate боюнча NP узак мөөнөттүү таасири кошумча изилдөөнү талап кылат.
Элүү төрт эркек Жаңы Зеландиялык ак коёндор (салмагы болжол менен 2,5-3 кг, жашы 3-3,5 ай) туш келди түрдө жасалма операция тобуна, булчуңдарды имплантациялоо тобуна (ME тобу) жана нерв тамырын имплантациялоо тобуна (NPE тобу) бөлүнгөн. Бардык эксперименталдык жол-жоболор Тяньцзинь ооруканасынын этика комитети тарабынан бекитилген жана эксперименталдык методдор бекитилген көрсөтмөлөргө так ылайык жүргүзүлгөн.
S. Sobajima 46 хирургиялык техникасына кээ бир жакшыртуулар жасалган. Ар бир коён капталдан жаткырылган абалда жайгаштырылды жана беш ырааттуу бел омуртка аралык дисктеринин (IVDs) алдыңкы бети арткы ретроперитонеалдык ыкманы колдонуу менен ачылды. Ар бир коёнго жалпы наркоз (20% уретан, кулактын венасы аркылуу 5 мл/кг) берилди. Кабыргалардын ылдыйкы четинен жамбаш кырына чейин, паравертебралдык булчуңдарга чейин 2 см вентралдык узунунан тери кесилген. L1 L6 үчүн оң anterolateral омурткасы үстүнкү тери астындагы ткандардын, ретроперитонеалдык ткандардын жана булчуңдардын курч жана туталак кесилиши менен ачыкка чыкты (сүрөт 6A). Диск деңгээли L5-L6 диск деңгээли үчүн анатомиялык белги катары жамбаштын кырын колдонуу менен аныкталган. 16 калибрлүү ийне менен L5 омурткасынын аягы пластинкасынын жанынан 3 мм тереңдикте тешик бургула (сүрөт 6В). L1-L2 омуртка аралык дискте autologous ядро pulposus аспирациялоо үчүн 5 мл шприц колдонуу (сүрөт. 6C). Ар бир топтун талаптарына ылайык ядро pulposus же булчуң алып салуу. Бургулоочу тешик тереңдетилгенден кийин операция учурунда омуртка денесинин периосталдык тканына зыян келтирбөөгө кам көрүү менен терең фасцияга, үстүнкү фассияга жана териге сиңүүчү тигиштер коюлат.
(A) L5-L6 диск posterolateral retroperitoneal мамиле аркылуу дуушар болот. (B) 16-кабар ийне менен L5 акыркы пластинкасынын жанында тешик бургула. (C) Autologous MFs жыйналат.
Жалпы наркоз 20% уретан (5 мл/кг) менен кулактын венасы аркылуу берилип, операциядан кийинки 12, 16 жана 20 жумада бел омурткасынын рентгенографиясы кайталанган.
Коёндор операциядан кийин 12, 16 жана 20 жумада кетаминди (25,0 мг/кг) жана венага натрий пентобарбиталын (1,2 г/кг) булчуңга сайып, курмандыкка чалышты. Гистологиялык анализ үчүн бүт омурткасы алынып, чыныгы анализ жасалды. Сандык тескери транскрипция (RT-qPCR) жана Western blotting иммундук факторлордун өзгөрүүлөрүн аныктоо үчүн колдонулган.
MRI изилдөөлөр ортогоналдык буту катушка кабылдагыч менен жабдылган 3.0 T клиникалык магнит (GE Medical Systems, Florence, SC) колдонуу менен коёндордо жүргүзүлдү. Коёндор кулак тамыры аркылуу 20% уретан (5 мл/кг) менен анестезияланып, анан бели 5 дюймдук тегерек беттик катушка (GE Medical Systems) борборлоштурулган магниттин ичине жаткырылды. Coronal T2 салмактанып алынган локализатор сүрөттөрү (TR, 1445 мс; TE, 37 мс) L3-L4тен L5-L6га чейин бел дискинин жайгашкан жерин аныктоо үчүн алынган. Сагитталдык тегиздиктин T2-салмактуу кесимдери төмөнкү орнотуулар менен алынды: 2200 мс кайталоо убактысы (TR) жана 70 мс жаңырык убактысы (TE) менен тез айлануу-эхо ырааттуулугу, матрица; 260 жана сегиз дүүлүктүрүүчү көрүү талаасы; Кесүү калыңдыгы 2 мм, боштук 0,2 мм болгон.
Акыркы сүрөт тартылып, акыркы коён өлтүрүлгөндөн кийин, гистологиялык изилдөө үчүн жасалма, булчуңдар салынган жана NP дисктери алынып салынды. Кыртыштар 10% нейтралдуу буфердик формалинге 1 жума бою фиксацияланып, этилендиаминтетрауксус кислотасы менен декальцификацияланган жана парафин менен кесилген. Ткань блоктору парафинге салынып, микротомдун жардамы менен сагиталдык бөлүктөргө (калыңдыгы 5 мкм) кесилген. Бөлүктөр гематоксилин жана эозин (H&E) менен боёлгон.
Ар бир топтогу коёндордон омуртка аралык дисктерди чогулткандан кийин, өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык UNIQ-10 колонкасы (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Кытай) жана ImProm II тескери транскрипция системасы (Promega Inc. , Мэдисон, WI, АКШ). Тескери транскрипция жасалды.
RT-qPCR өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., АКШ) жана SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Oldrich, Сент-Луис, МО, АКШ) аркылуу аткарылган. ПТР реакциясынын көлөмү 20 мкл жана 1,5 мкл суюлтулган cDNA жана 0,2 мкм ар бир праймерди камтыган. Primer OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) тарабынан иштелип чыккан жана Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Кытай) тарабынан чыгарылган (1-таблица). Төмөнкү жылуулук айлануу шарттары колдонулган: 94°Cде 2 мүнөткө алгачкы полимеразды активдештирүү кадамы, андан кийин шаблон денатурациясы үчүн 94°Cде 15 секунддан турган 40 цикл, 60°Cде 1 мүнөткө күйгүзүү, узартуу жана флуоресценция. өлчөөлөр 72°C 1 мүнөткө аткарылган. Бардык үлгүлөр үч жолу күчөтүлгөн жана орточо мааниси RT-qPCR талдоо үчүн колдонулган. Күчөтүү маалыматтары FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, АКШ) аркылуу талданган. IL-4, IL-17 жана IFN-γ ген экспрессиясы эндогендик башкарууга (ACTB) нормалдаштырылган. Максаттуу mRNAнын салыштырмалуу экспрессия деңгээли 2-ΔΔCT ыкмасын колдонуу менен эсептелген.
Жалпы протеин RIPA лизис буферинде (протеаза жана фосфатаза ингибиторунун коктейлин камтыган) кыртыш гомогенизатору аркылуу кыртыштардан алынган жана андан кийин кыртыш калдыктарын алып салуу үчүн 13 000 айн/мин 4 20 мүнөттө центрифугаланган. Элүү микрограмм протеин ар бир тилкеге жүктөлүп, 10% SDS-PAGE менен бөлүнүп, андан кийин PVDF мембранасына өткөрүлүп берилди. Блоктоо бөлмө температурасында 1 саат бою 0,1% Tween 20 камтыган Tris-буферленген тузда (TBS) 5% майсыз кургак сүттө аткарылды. Мембрана коёндун декоринге каршы негизги антителосу (1:200 суюлтулган; Бостер, Вухан, Кытай) (1:200 суюлтулган; Биосс, Пекин, Кытай) менен түнү бою 4°Cде инкубацияланган жана экинчи күндөрү реакцияга кирген; экинчилик антитело менен (эчкиге каршы коёнго каршы иммуноглобулин G 1:40 000 суюлтууда) хрен пероксидазасы менен (Бостер, Ухань, Кытай) 1 саат бою бөлмө температурасында. Вест-блот сигналдары рентген нурлануусунан кийин хемилюминесценттик мембранадагы хемилюминесценциянын жогорулашы менен аныкталган. Денситометриялык анализ үчүн блоттор сканерден өткөрүлдү жана BandScan программалык камсыздоосу аркылуу сандык аныкталды жана натыйжалар максаттуу гендин иммунореактивдүүлүгүнүн тубулиндин иммунореактивдүүлүгүнө катышы катары көрсөтүлдү.
Статистикалык эсептөөлөр SPSS16.0 программалык пакетин (SPSS, АКШ) колдонуу менен жүргүзүлдү. Изилдөө учурунда чогултулган маалыматтар орточо ± стандарттык четтөө (орточо ± SD) катары көрсөтүлдү жана эки топтун ортосундагы айырмачылыктарды аныктоо үчүн дисперсиянын бир тараптуу кайталануучу чараларын талдоо (ANOVA) аркылуу талданды. P <0,05 статистикалык жактан маанилүү деп эсептелген.
Ошентип, омурткалардын денесине аутологиялык NPтерди имплантациялоо жана макроанатомиялык байкоо жүргүзүү, MRI анализи, гистологиялык баалоо жана молекулярдык биологиялык анализ жүргүзүү аркылуу МКнын жаныбарлардын моделин түзүү адамдын МКсынын механизмдерин баалоо жана түшүнүү жана жаңы терапевтикалык ыкмаларды иштеп чыгуу үчүн маанилүү курал болуп калышы мүмкүн. кийлигишүүлөр.
Бул макаланы кантип келтирсе болот: Han, C. et al. Модик өзгөрүүлөрдүн жаныбар модели бел омурткасынын субхондралдык сөөгүнө autologous nucleus pulposus имплантациялоо жолу менен түзүлгөн. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. жана Boos, N. Магниттик-резонанстык элестетүүлөр бел омурткалары: диск грыжа жана кармап калуу таралышы, нерв тамыры кысуу, аягы табак аномалиялар жана симптомсуз ыктыярдуу фасет биргелешкен остеоартрит . чен. Radiology 209, 661–666, дой: 10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS жана Leboeuf-Eed, K. Модик өзгөрүүлөр жана клиникалык ачылыштар менен байланышы. European Spine Journal: Europe Spine Коомунун расмий жарыялоо, Омуртканын деформациясы боюнча Европа коому жана Жатыр моюнчасынын омурткасын изилдөө боюнча Европа коому 15, 1312-1319, дой: 10.1007 / s00586-006-0185-x (2006).
Куисма, М. жана башкалар. бел омуртка endplates менен Modic өзгөрүүлөр: орто жаштагы эркек жумушчулардын белдин оорушун жана sciatica менен таралышы жана бирикмеси. Spine 32, 1116–1122, дой: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
де Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. жана Dalinka, M. бел омуртканын дегенеративдик оорунун аягында пластинкага жакын сөөк чучугунун MRI өзгөрүүлөр. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, дой: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ жана Картер, JR Degenerative диск оорусу: MRI менен омуртка чучугунун өзгөрүүлөргө баа берүү. Radiology 166, 193–199, дой: 10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Модик, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS жана Картер, JR дегенеративдик диск оорусунун сүрөтү. Radiology 168, 177–186, дои: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Неовертебралдык endplate (Modic) сигналдардын жалпы калктын болжолдоочулары. European Spine Journal: Европа Омуртканын Коомунун, Омуртканын деформациясынын Европа Коомунун жана Жатын моюнчасынын омурткасын изилдөө боюнча Европа коомунун расмий жарыялоосу, 19-бөлүм, 129-135, DOI: 10.1007 / s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB жана Mannisch, бел диск грыжа кийин K. Modic өзгөрүүлөр. European Spine Journal: Европа Омуртка Коомунун расмий жарыялоосу, Омуртканын деформациясынын Европа Коому жана Жатыр моюнчасынын омурткасын изилдөө боюнча Европа коому 16, 977-982, дой: 10.1007 / s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. жана Kaapa, E. Modic түрү I өзгөрүүлөр тез прогрессивдүү деформация диск бузулушун алдын ала алат: 1 жылдык келечектүү изилдөө. European Spine Journal 21, 1135-1142, дой: 10.1007 / s00586-012-2147-9 (2012).
Ху, ZJ, Чжао, FD, Fang, XQ жана Fan, SW Modic өзгөртүүлөр: мүмкүн себептери жана бел диск бузулушуна салым. Медициналык гипотезалар 73, 930–932, дой: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Крок, HV Ички дисктин жарылышы. 50 жылдан ашуун диск пролапс көйгөйлөр. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650-653 (1986).
Посттун убактысы: 2024-жылдын 13-декабрына чейин