Nature.com сайтына киргениңиз үчүн рахмат. Сиз колдонуп жаткан браузердин версиясында CSS колдоосу чектелүү. Эң жакшы натыйжаларга жетүү үчүн, жаңы браузерди колдонууну сунуштайбыз (же Internet Explorerде шайкештик режимин өчүрүү). Ошол эле учурда, үзгүлтүксүз колдоону камсыз кылуу үчүн, биз сайтты стилдерсиз жана JavaScriptсиз көрсөтөбүз.
Модикалык өзгөрүүнүн (МӨ) жаныбарлардын моделдерин түзүү МӨнү изилдөө үчүн маанилүү негиз болуп саналат. Жаңы Зеландиянын элүү төрт ак коёну жасалма операция тобуна, булчуң имплантация тобуна (МӨ тобу) жана ядро пульпосус имплантация тобуна (НПЭ тобу) бөлүнгөн. НПЭ тобунда омуртка аралык диск алдыңкы-латералдык бел хирургиялык ыкмасы менен ачыкка чыгарылып, L5 омуртка денесин учтук пластинканын жанына тешүү үчүн ийне колдонулган. НП L1/2 омуртка аралык дисктен шприц менен алынып, ага сайылган. Субхондралдык сөөктө тешик бургуланган. Булчуң имплантация тобунда жана жасалма операция тобунда хирургиялык процедуралар жана бургулоо ыкмалары НП имплантация тобундагыдай эле болгон. МӨ тобунда булчуңдун бир бөлүгү тешикке салынган, ал эми жасалма операция тобунда тешикке эч нерсе салынган эмес. Операциядан кийин МРТ сканерлөө жана молекулярдык биологиялык тестирлөө жүргүзүлдү. НПЭ тобунда сигнал өзгөрдү, бирок жасалма операция тобунда жана МӨ тобунда сигналдын айкын өзгөрүшү байкалган жок. Гистологиялык байкоо имплантацияланган жерде ткандардын анормалдуу көбөйүшү байкалганын жана NPE тобунда IL-4, IL-17 жана IFN-γ экспрессиясы жогорулаганын көрсөттү. NPди субхондралдык сөөккө имплантациялоо MCнин жаныбар моделин түзө алат.
Модик өзгөрүүлөр (МӨ) – бул магниттик-резонанстык томографияда (МРТ) көрүнгөн омурткалардын учтук пластинкаларынын жана ага жакын жилик чучугунун жабыркашы. Алар тиешелүү симптомдору бар адамдарда көп кездешет1. Көптөгөн изилдөөлөр МКнын белдин оорушу (БС) менен байланышынан улам маанисин баса белгилеген2,3. де Рус жана башкалар4 жана Модик жана башкалар5 алгач омурткалардын жилик чучугундагы субхондралдык сигнал аномалияларынын үч башка түрүн өз алдынча сүрөттөшкөн. Модик I типтеги өзгөрүүлөр – бул T1 салмактуу (T1W) ырааттуулуктарындагы гипопоинтензия жана T2 салмактуу (T2W) ырааттуулуктарындагы гиперинтензия. Бул жабыркоо жилик чучугундагы жаракалуу учтук пластинкаларды жана ага жакын кан тамыр грануляциялык ткандарды көрсөтөт. Модик II типтеги өзгөрүүлөр T1W жана T2W ырааттуулуктарындагы жогорку сигналды көрсөтөт. Бул жабыркоо түрүндө учтук пластинканын бузулушу, ошондой эле ага жакын жилик чучугунун гистологиялык майлуу алмаштырылышы байкалат. Модик III типтеги өзгөрүүлөр T1W жана T2W ырааттуулуктарындагы төмөнкү сигналды көрсөтөт. Учтук пластинкаларга туура келген склеротикалык жабыркоолор байкалган6. МК омуртка системасынын патологиялык оорусу деп эсептелет жана омуртка системасынын көптөгөн дегенеративдик оорулары менен тыгыз байланышта7,8,9.
Колдо болгон маалыматтарды эске алуу менен, бир нече изилдөөлөр MC этиологиясы жана патологиялык механизмдери боюнча кеңири түшүнүктөрдү берди. Альберт жана башкалар MC диск грыжасындан келип чыгышы мүмкүн деп божомолдошкон8. Ху жана башкалар MCди дисктин катуу дегенерациясына байланыштырышкан10. Крок "ички дисктин жарылышы" концепциясын сунуштаган, анда кайталануучу диск травмасы учтук пластинкада микрожырыктарга алып келиши мүмкүн деп айтылат. Жырык пайда болгондон кийин, ядро пульпосус (NP) тарабынан учтук пластинканын бузулушу аутоиммундук жоопту козгошу мүмкүн, бул андан ары MC11дин өнүгүшүнө алып келет. Ма жана башкалар ушул сыяктуу көз карашты бөлүшүп, NP тарабынан индукцияланган аутоиммунитет MC12нин патогенезинде негизги ролду ойной тургандыгын билдиришкен.
Иммундук системанын клеткалары, айрыкча CD4+ Т жардамчы лимфоциттери, аутоиммунитеттин патогенезинде маанилүү ролду ойнойт13. Жакында ачылган Th17 кичи тобу сезгенүүнү пайда кылуучу цитокин IL-17ди өндүрөт, хемокин экспрессиясын күчөтөт жана жабыркаган органдардагы Т клеткаларын IFN-γ14 өндүрүү үчүн стимулдайт. Th2 клеткалары иммундук жооптордун патогенезинде да уникалдуу ролду ойнойт. IL-4тин Th2 клеткасынын өкүлү катары экспрессиясы оор иммунопатологиялык кесепеттерге алып келиши мүмкүн15.
MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 боюнча көптөгөн клиникалык изилдөөлөр жүргүзүлгөнү менен, адамдарда көп кездешкен MC процессин туурай алган жана этиологиясын же максаттуу терапия сыяктуу жаңы дарылоо ыкмаларын изилдөө үчүн колдонула турган ылайыктуу жаныбарлардын эксперименталдык моделдери дагы эле жетишсиз. Бүгүнкү күнгө чейин MCнин бир нече гана жаныбарлардын моделдери негизги патологиялык механизмдерди изилдегени кабарланган.
Альберт жана Ма тарабынан сунушталган аутоиммундук теорияга негизделген бул изилдөө бургуланган омуртка учунун жанына NP автотрансплантациялоо аркылуу коёндун MC моделин түзгөн. Башка максаттар - жаныбарлардын моделдеринин гистологиялык мүнөздөмөлөрүн байкоо жана MCнин өнүгүшүндөгү NPнин өзгөчө механизмдерин баалоо. Бул максатта биз MCнин өнүгүшүн изилдөө үчүн молекулярдык биология, МРТ жана гистологиялык изилдөөлөр сыяктуу ыкмаларды колдонобуз.
Эки коён операция учурунда кансырап өлдү, ал эми төрт коён МРТ учурунда наркоз учурунда өлдү. Калган 48 коён аман калып, операциядан кийин эч кандай жүрүм-турумдук же неврологиялык белгилер байкалган жок.
МРТ ар кандай тешиктерге киргизилген ткандардын сигнал интенсивдүүлүгү ар кандай экенин көрсөтүп турат. NPE тобундагы L5 омуртка денесинин сигнал интенсивдүүлүгү киргизилгенден кийин 12, 16 жана 20 жумада акырындык менен өзгөргөн (T1W ырааттуулугу төмөн сигналды, ал эми T2W ырааттуулугу аралаш сигналды жана төмөн сигналды көрсөткөн) (1C-сүрөт), ал эми киргизилген бөлүктөрүнүн калган эки тобунун МРТ көрүнүштөрү ошол эле мезгилде салыштырмалуу туруктуу бойдон калган (1A, B-сүрөттөр).
(A) Коёндун бел омурткасынын 3 убакыт чекитиндеги репрезентативдик ырааттуу МРТлары. Жасалма операция тобунун сүрөттөрүндө эч кандай сигнал аномалиялары табылган жок. (B) ME тобундагы омуртка денесинин сигнал мүнөздөмөлөрү жасалма операция тобундагыларга окшош жана убакыттын өтүшү менен киргизүү жеринде эч кандай олуттуу сигнал өзгөрүүсү байкалган жок. (C) NPE тобунда төмөнкү сигнал T1W ырааттуулугунда даана көрүнүп турат, ал эми аралаш сигнал жана төмөнкү сигнал T2W ырааттуулугунда даана көрүнүп турат. 12 жумалык мезгилден 20 жумалык мезгилге чейин T2W ырааттуулугундагы төмөнкү сигналдарды курчап турган спорадикалык жогорку сигналдар азаят.
NPE тобундагы омуртка денесинин имплантацияланган жеринде сөөктүн айкын гиперплазиясын көрүүгө болот жана сөөктүн гиперплазиясы NPE тобуна салыштырмалуу 12 жумадан 20 жумага чейин тезирээк пайда болот (2C-сүрөт), моделденген омуртка денелеринде олуттуу өзгөрүү байкалган жок; Шам тобу жана ME тобу (2C-сүрөт) 2A, B).
(A) Имплантацияланган бөлүктөгү омуртка денесинин бети абдан жылмакай, тешик жакшы айыгат жана омуртка денесинде гиперплазия жок. (B) ME тобундагы имплантацияланган жердин формасы жасалма операция тобундагыга окшош жана убакыттын өтүшү менен имплантацияланган жердин көрүнүшүндө эч кандай айкын өзгөрүү жок. (C) NPE тобундагы имплантацияланган жерде сөөк гиперплазиясы пайда болгон. Сөөк гиперплазиясы тездик менен көбөйүп, ал тургай омуртка аралык диск аркылуу контралатералдык омуртка денесине чейин созулган.
Гистологиялык анализ сөөктүн пайда болушу жөнүндө кененирээк маалымат берет. 3-сүрөттө H&E менен боёлгон операциядан кийинки кесилиштердин сүрөттөрү көрсөтүлгөн. Жасалма операция тобунда хондроциттер жакшы жайгашкан жана клеткалардын көбөйүшү аныкталган эмес (3А-сүрөт). ME тобундагы кырдаал жасалма операция тобундагыга окшош болгон (3B-сүрөт). Бирок, NPE тобунда имплантацияланган жерде көп сандагы хондроциттер жана NP сыяктуу клеткалардын көбөйүшү байкалган (3C-сүрөт);
(A) Трабекулаларды акыркы пластинканын жанында көрүүгө болот, хондроциттер бирдей клетка өлчөмү жана формасы менен тыкан жайгашкан жана көбөйүү жок (40 эсе). (B) ME тобундагы имплантациялоочу жердин абалы жасалма топко окшош. Трабекулаларды жана хондроциттерди көрүүгө болот, бирок имплантациялоочу жерде көбөйүү байкалбайт (40 эсе). (B) Хондроциттер жана NP сыяктуу клеткалар бир кыйла көбөйөрүн жана хондроциттердин формасы жана өлчөмү бирдей эмес экенин (40 эсе) көрүүгө болот.
Интерлейкин 4 (IL-4) мРНКсынын, интерлейкин 17 (IL-17) мРНКсынын жана интерферон γ (IFN-γ) мРНКсынын экспрессиясы NPE жана ME топторунда байкалган. Максаттуу гендердин экспрессия деңгээлдери салыштырылганда, IL-4, IL-17 жана IFN-γ ген экспрессиялары NPE тобунда ME тобуна жана жасалма операция тобуна салыштырмалуу бир кыйла жогорулаган (4-сүрөт) (P < 0,05). Жасалма операция тобуна салыштырмалуу, ME тобунда IL-4, IL-17 жана IFN-γ экспрессия деңгээлдери бир аз гана жогорулаган жана статистикалык өзгөрүүгө жеткен эмес (P > 0,05).
NPE тобундагы IL-4, IL-17 жана IFN-γ мРНК экспрессиясы жасалма операция тобуна жана ME тобуна караганда бир кыйла жогорку тенденцияны көрсөттү (P < 0,05).
Ал эми, ME тобундагы экспрессия деңгээлдери эч кандай олуттуу айырмачылыкты көрсөткөн жок (P>0,05).
Өзгөрүлгөн мРНК экспрессиясынын үлгүсүн ырастоо үчүн IL-4 жана IL-17ге каршы коммерциялык жактан жеткиликтүү антителолорду колдонуу менен вестерн-блот анализи жүргүзүлдү. 5A, B сүрөттөрүндө көрсөтүлгөндөй, ME тобу жана жасалма операция тобу менен салыштырганда, NPE тобунда IL-4 жана IL-17 белокторунун деңгээли бир кыйла жогорулаган (P < 0,05). Жасалма операция тобу менен салыштырганда, ME тобунда IL-4 жана IL-17 белокторунун деңгээли да статистикалык жактан маанилүү өзгөрүүлөргө жеткен жок (P> 0,05).
(A) NPE тобундагы IL-4 жана IL-17 белокторунун деңгээли ME тобундагы жана плацебо тобундагыга караганда бир кыйла жогору болгон (P < 0,05). (B) Вестерн-блот гистограммасы.
Операция учурунда алынган адамдардын үлгүлөрүнүн саны чектелүү болгондуктан, MC патогенези боюнча так жана деталдуу изилдөөлөр бир аз кыйын. Биз MCнин жаныбарлардагы моделин түзүүгө аракет кылдык, анын потенциалдуу патологиялык механизмдерин изилдөө үчүн. Ошол эле учурда, NP автотрансплантатынан улам пайда болгон MCнин жүрүшүн көзөмөлдөө үчүн радиологиялык баалоо, гистологиялык баалоо жана молекулярдык биологиялык баалоо колдонулду. Натыйжада, NP имплантация модели сигналдын интенсивдүүлүгүнүн 12 жумадан 20 жумага чейинки убакыт чекиттерине акырындык менен өзгөрүшүнө алып келди (T1W ырааттуулуктарындагы аралаш төмөн сигнал жана T2W ырааттуулуктарындагы төмөн сигнал), бул ткандардын өзгөрүүлөрүн көрсөтүп турат жана гистологиялык жана молекулярдык биологиялык баалоо радиологиялык изилдөөнүн жыйынтыктарын тастыктады.
Бул эксперименттин жыйынтыктары NPE тобундагы омуртка денесинин бузулуу жеринде визуалдык жана гистологиялык өзгөрүүлөр болгонун көрсөтүп турат. Ошол эле учурда, IL-4, IL-17 жана IFN-γ гендеринин, ошондой эле IL-4, IL-17 жана IFN-γ гендеринин экспрессиясы байкалган, бул омуртка денесиндеги аутологиялык ядро пульпосус тканынын бузулушу бир катар сигналдык жана морфологиялык өзгөрүүлөрдү жаратышы мүмкүн экенин көрсөтүп турат. Жаныбар моделинин омуртка денелеринин сигналдык мүнөздөмөлөрү (T1W ырааттуулугундагы төмөн сигнал, T2W ырааттуулугундагы аралаш сигнал жана төмөн сигнал) адамдын омуртка клеткаларынын сигналдык мүнөздөмөлөрүнө абдан окшош экенин жана МРТ мүнөздөмөлөрү гистологиянын жана жалпы анатомиянын байкоолорун тастыктайт, башкача айтканда, омуртка денесинин клеткаларындагы өзгөрүүлөр прогрессивдүү. Курч травмадан улам пайда болгон сезгенүү реакциясы пункциядан көп өтпөй пайда болушу мүмкүн болсо да, МРТнын жыйынтыктары прогрессивдүү түрдө көбөйүп жаткан сигналдык өзгөрүүлөр пункциядан 12 жумадан кийин пайда болуп, МРТ өзгөрүүлөрүнүн калыбына келүү же кайра калыбына келүү белгилерисиз 20 жумага чейин сакталып калганын көрсөттү. Бул жыйынтыктар аутологиялык омурткалуу NP коёндордо прогрессивдүү MV аныктоонун ишенимдүү ыкмасы экенин көрсөтүп турат.
Бул пункция модели жетиштүү көндүмдөрдү, убакытты жана хирургиялык күч-аракетти талап кылат. Алдын ала эксперименттерде паравертебралдык байламталуу түзүлүштөрдү кесүү же ашыкча стимуляциялоо омуртка остеофиттеринин пайда болушуна алып келиши мүмкүн. Жанаша жайгашкан дисктерге зыян келтирбөөгө же кыжырдантпоого этият болуу керек. Ырааттуу жана кайталануучу натыйжаларды алуу үчүн кирүү тереңдигин көзөмөлдөө керек болгондуктан, биз 3 мм узундуктагы ийненин кабыгын кесип, кол менен тыгын жасадык. Бул тыгынды колдонуу омуртка денесинде бирдей бургулоо тереңдигин камсыз кылат. Алдын ала эксперименттерде операцияга катышкан үч ортопед-хирург 16 калибрлүү ийнелер менен иштөө 18 калибрлүү ийнелерге же башка ыкмаларга караганда оңой экенин аныкташкан. Бургулоо учурунда ашыкча кан кетпөө үчүн, ийнени бир азга кыймылсыз кармоо ылайыктуураак киргизүү тешигин камсыз кылат, бул белгилүү бир деңгээлдеги MCди ушундай жол менен көзөмөлдөөгө болорун көрсөтүп турат.
Көптөгөн изилдөөлөр MCге багытталганы менен, MC25,26,27нин этиологиясы жана патогенези жөнүндө аз маалымат бар. Мурунку изилдөөлөрүбүзгө таянып, биз аутоиммунитет MC12нин пайда болушунда жана өнүгүшүндө негизги ролду ойной турганын аныктадык. Бул изилдөөдө антигенди стимуляциялагандан кийин CD4+ клеткаларынын негизги дифференциация жолдору болгон IL-4, IL-17 жана IFN-γ сандык экспрессиясы изилденген. Биздин изилдөөдө, терс топко салыштырмалуу, NPE тобунда IL-4, IL-17 жана IFN-γ экспрессиясы жогору болгон, ал эми IL-4 жана IL-17 белокторунун деңгээли да жогору болгон.
Клиникалык жактан алганда, диск грыжасы бар бейтаптардын NP клеткаларында IL-17 мРНК экспрессиясы жогорулаган28. Ден соолугу чың контролдук топко салыштырмалуу курч кысылбаган диск грыжасы моделинде IL-4 жана IFN-γ экспрессиясынын деңгээлинин жогорулаганы да байкалган29. IL-17 аутоиммундук ооруларда сезгенүүдө, ткандардын жабыркашында негизги ролду ойнойт30 жана IFN-γ31ге иммундук жоопту күчөтөт. MRL/lpr чычкандарында32 жана аутоиммунитетке сезгич чычкандарда IL-17 аркылуу ткандардын жабыркашынын күчөгөнү катталган33. IL-4 сезгенүүнү пайда кылуучу цитокиндердин (мисалы, IL-1β жана TNFα) экспрессиясын жана макрофагдардын активдешүүсүн басаңдата алат34. IL-4 мРНК экспрессиясы NPE тобунда IL-17 жана IFN-γ менен бир убакта айырмаланганы кабарланган; NPE тобунда IFN-γ мРНК экспрессиясы башка топторго караганда бир топ жогору болгон. Ошондуктан, IFN-γ өндүрүшү NP интеркаляциясынан келип чыккан сезгенүү реакциясынын медиатору болушу мүмкүн. Изилдөөлөр көрсөткөндөй, IFN-γ бир нече клетка түрлөрү, анын ичинде активдештирилген 1-типтеги жардамчы Т клеткалары, табигый киллер клеткалары жана макрофагдар тарабынан өндүрүлөт35,36 жана иммундук реакцияларды күчөтүүчү негизги сезгенүүнү пайда кылуучу цитокин37 болуп саналат.
Бул изилдөө аутоиммундук реакция MCнин пайда болушуна жана өнүгүшүнө катышышы мүмкүн экенин көрсөтүп турат. Луома жана башкалар MC жана көрүнүктүү NP сигнал мүнөздөмөлөрү MRIде окшош экенин жана экөө тең T2W ырааттуулугунда жогорку сигналды көрсөтөрүн аныкташкан38. Айрым цитокиндер, мисалы, IL-139, MCнин пайда болушу менен тыгыз байланышта экени тастыкталган. Ма жана башкалар NPнин өйдө же ылдый чыгып турушу MC12нин пайда болушуна жана өнүгүшүнө чоң таасир этиши мүмкүн деп божомолдошкон. Бобечко40 жана Герцбейн жана башкалар41 NP төрөлгөндөн баштап кан тамырларга кире албаган иммунотолеранттуу ткань экенин билдиришкен. NP чыгып туруучу ткандары кан менен камсыздоого бөтөн денелерди киргизип, ошону менен жергиликтүү аутоиммундук реакцияларды ортомчулук кылат42. Аутоиммундук реакциялар көптөгөн иммундук факторлорду пайда кылышы мүмкүн жана бул факторлор ткандарга тынымсыз таасир эткенде, алар сигнал берүүнүн өзгөрүшүнө алып келиши мүмкүн43. Бул изилдөөдө IL-4, IL-17 жана IFN-γ ашыкча экспрессиясы типтүү иммундук факторлор болуп саналат, бул NP менен MCнин ортосундагы тыгыз байланышты дагы бир жолу далилдейт44. Бул жаныбар модели NPнин жарылышын жана акыркы пластинкага киришин жакшы туурайт. Бул процесс аутоиммунитеттин MCге тийгизген таасирин дагы бир жолу көрсөттү.
Күтүлгөндөй, бул жаныбарлардын модели бизге MC изилдөө үчүн мүмкүн болгон платформаны берет. Бирок, бул моделдин дагы эле айрым чектөөлөрү бар: биринчиден, жаныбарларды байкоо этабында кээ бир ортоңку баскычтагы коёндорду гистологиялык жана молекулярдык биологиялык текшерүү үчүн эвтаназиялоо керек, ошондуктан кээ бир жаныбарлар убакыттын өтүшү менен "колдонулбай калат". Экинчиден, бул изилдөөдө үч убакыт чекити коюлганы менен, тилекке каршы, биз MCдин бир гана түрүн моделдедик (Modic I типтеги өзгөрүү), андыктан ал адамдын оорусунун өнүгүү процессин чагылдыруу үчүн жетишсиз жана бардык сигналдык өзгөрүүлөрдү жакшыраак байкоо үчүн көбүрөөк убакыт чекиттерин коюу керек. Үчүнчүдөн, ткандардын түзүлүшүндөгү өзгөрүүлөрдү гистологиялык боёо менен чындап эле ачык көрсөтүүгө болот, бирок кээ бир атайын ыкмалар бул моделдеги микроструктуралык өзгөрүүлөрдү жакшыраак ачып бере алат. Мисалы, коёндун омуртка аралык дисктеринде фиброкемирчектердин пайда болушун талдоо үчүн поляризацияланган жарык микроскопиясы колдонулган45. NPнин MCге жана акыркы пластинкага узак мөөнөттүү таасири андан ары изилдөөнү талап кылат.
Жаңы Зеландиянын элүү төрт эркек ак коёну (салмагы болжол менен 2,5-3 кг, жашы 3-3,5 ай) кокустук түрдө жасалма операция тобуна, булчуң имплантациялоо тобуна (ME тобу) жана нерв тамырларын имплантациялоо тобуна (NPE тобу) бөлүндү. Бардык эксперименталдык процедуралар Тяньцзинь ооруканасынын Этика комитети тарабынан бекитилген жана эксперименталдык ыкмалар бекитилген көрсөтмөлөргө так ылайык жүргүзүлдү.
S. Sobajima 46нын хирургиялык ыкмасына бир аз жакшыртуулар киргизилди. Ар бир коён капталдан жатып, беш удаалаш бел омуртка аралык дискинин (IVD) алдыңкы бети постеролатералдык ретроперитонеалдык ыкма менен ачыкка чыгарылды. Ар бир коёнго жалпы наркоз берилди (20% уретан, кулак венасы аркылуу 5 мл/кг). Кабыргалардын төмөнкү четинен жамбаш четине чейин, вентральдык жактан паравертебралдык булчуңдарга чейин 2 см териге узунунан кесүү жасалды. L1ден L6га чейинки оң алдыңкы каптал омуртка үстүнкү тери астындагы тканды, ретроперитонеалдык тканды жана булчуңдарды курч жана мокок кесип салуу менен ачыкка чыгарылды (6А-сүрөт). Дисктин деңгээли L5-L6 диск деңгээли үчүн анатомиялык ориентир катары жамбаш четин колдонуу менен аныкталды. L5 омурткасынын учтук пластинкасына жакын жерде 3 мм тереңдикке чейин тешик бургулоо үчүн 16 калибрлүү пункциялык ийнени колдонуңуз (6B-сүрөт). L1-L2 омуртка аралык дискиндеги аутологиялык пульпосус ядросун сордуруу үчүн 5 мл шприцти колдонуңуз (6C-сүрөт). Ар бир топтун талаптарына ылайык пульпосус ядросун же булчуңду алып салыңыз. Бургулоочу тешик тереңдетилгенден кийин, операция учурунда омуртка денесинин периосталдык тканына зыян келтирбөөгө аракет кылып, терең фасцияга, үстүртөн фасцияга жана териге сиңүүчү тигиштер коюлат.
(A) L5–L6 диски постеролатералдык ретроперитонеалдык ыкма менен ачылат. (B) L5 учтук пластинасынын жанына тешик бургулоо үчүн 16 калибрлүү ийне колдонулат. (C) Аутологиялык MFтер алынат.
Жалпы наркоз кулак венасы аркылуу 20% уретан (5 мл/кг) менен берилген, ал эми бел омурткасынын рентгенографиясы операциядан кийин 12, 16 жана 20 жумада кайталанган.
Коёндор операциядан 12, 16 жана 20 жумадан кийин кетамин (25,0 мг/кг) жана натрий пентобарбиталы (1,2 г/кг) венага сайылып, союлган. Гистологиялык анализ үчүн бүтүндөй омурткасы алынып салынган жана чыныгы анализ жүргүзүлгөн. Иммундук факторлордун өзгөрүүлөрүн аныктоо үчүн сандык тескери транскрипция (RT-qPCR) жана вестерн-блоттинг колдонулган.
МРТ изилдөөлөрү ортогоналдык буттун катушка кабыл алгычы менен жабдылган 3,0 Т клиникалык магнитти (GE Medical Systems, Флоренс, Түштүк Каролина) колдонуу менен коёндорго жүргүзүлдү. Коёндор кулак венасы аркылуу 20% уретан (5 мл/кг) менен наркоздолуп, андан кийин магниттин ичине чалкасынан жаткырылып, бел аймагы 5 дюймдук диаметрдеги тегерек беттик катушканын (GE Medical Systems) борборунда жайгаштырылды. L3–L4төн L5–L6га чейин бел дискинин жайгашкан жерин аныктоо үчүн короналдык T2 салмакталган локализатор сүрөттөрү (TR, 1445 мс; TE, 37 мс) алынды. Сагитталдык тегиздиктеги T2 салмакталган кесимдер төмөнкү жөндөөлөр менен алынды: кайталоо убактысы (TR) 2200 мс жана жаңырык убактысы (TE) 70 мс болгон тез спин-жаңыруу ырааттуулугу, матрица; көрүү талаасы 260 жана сегиз стимул; кесүү калыңдыгы 2 мм, аралыгы 0,2 мм болгон.
Акыркы сүрөт тартылып, акыркы коён өлтүрүлгөндөн кийин, гистологиялык изилдөө үчүн жасалма, булчуңга орнотулган жана NP дисктери алынып салынган. Ткандар 1 жума бою 10% нейтралдуу буферленген формалинде фиксацияланып, этилендиаминтетрауксус кислотасы менен кальцийсиздендирилип, парафин кесилген. Ткан блоктору парафинге салынып, микротомду колдонуп, сагитталдык кесимдерге (5 мкм калыңдыкта) кесилген. Кесилген жерлер гематоксилин жана эозин (H&E) менен боёлгон.
Ар бир топтогу коёндордон омуртка аралык дисктерди чогулткандан кийин, жалпы РНК өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык UNIQ-10 колонкасын (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Кытай) жана ImProm II тескери транскрипция системасын (Promega Inc., Мэдисон, Висконсин, АКШ) колдонуу менен бөлүнүп алынган. Тескери транскрипция аткарылган.
RT-qPCR өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., АКШ) жана SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, MO, АКШ) колдонулуп жүргүзүлдү. ПТР реакциясынын көлөмү 20 мкл болгон жана 1,5 мкл суюлтулган кДНКны жана ар бир праймердин 0,2 мкМ камтыган. Праймерлер OligoPerfect Designer (Invitrogen, Валенсия, Калифорния) тарабынан иштелип чыккан жана Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Кытай) тарабынан чыгарылган (1-таблица). Төмөнкү жылуулук циклинин шарттары колдонулган: баштапкы полимеразаны активдештирүү кадамы 94°Cде 2 мүнөт, андан кийин шаблонду денатурациялоо үчүн 94°Cде ар бири 15 секунддан турган 40 цикл, 60°Cде 1 мүнөт күйгүзүү, кеңейтүү жана флуоресценция. Өлчөөлөр 72°Cде 1 мүнөт жүргүзүлдү. Бардык үлгүлөр үч жолу күчөтүлдү жана орточо маани RT-qPCR анализи үчүн колдонулган. Күчөтүү маалыматтары FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, АКШ) аркылуу талданды. IL-4, IL-17 жана IFN-γ генинин экспрессиясы эндогендик контролго (ACTB) нормалдаштырылды. Максаттуу мРНКнын салыштырмалуу экспрессия деңгээлдери 2-ΔΔCT ыкмасын колдонуу менен эсептелген.
Жалпы белок RIPA лизис буфериндеги (протеаза жана фосфатаза ингибиторунун коктейлин камтыган) ткандардын гомогенизатору аркылуу ткандардан бөлүнүп алынып, андан кийин ткандардын калдыктарын кетирүү үчүн 4°C температурада 20 мүнөт 13 000 айн/мин ылдамдыкта центрифугаланган. Ар бир тилкеге элүү микрограмм белок жүктөлүп, 10% SDS-PAGE менен бөлүнүп, андан кийин PVDF мембранасына өткөрүлгөн. Блоктоо бөлмө температурасында 1 саат бою 0,1% Tween 20 камтыган Tris-буфердик туздуу эритмесинде (TBS) 5% майсыз кургак сүттө жүргүзүлгөн. Мембрана коёндун антидекорин баштапкы антителосу (1:200 суюлтулган; Бостер, Ухань, Кытай) (1:200 суюлтулган; Bioss, Пекин, Кытай) менен 4°C температурада түнөп, экинчи күндөрү реакцияга кирген; бөлмө температурасында 1 саат бою хрен пероксидазасы (Бостер, Ухань, Кытай) менен айкалыштырылган экинчилик антитело (эчкинин коёнго каршы иммуноглобулини G 1:40 000 суюлтууда) менен. Рентген нурлануусунан кийин хемилюминесценция мембранасында хемилюминесценциянын жогорулашы менен вестерн-блот сигналдары аныкталган. Денситометриялык анализ үчүн блоттор сканерленип, BandScan программасын колдонуу менен сандык жактан аныкталган жана натыйжалар максаттуу гендин иммунореактивдүүлүгүнүн тубулин иммунореактивдүүлүгүнө катышы катары көрсөтүлгөн.
Статистикалык эсептөөлөр SPSS16.0 программалык пакетин (SPSS, АКШ) колдонуу менен жүргүзүлдү. Изилдөө учурунда чогултулган маалыматтар орточо ± стандарттык четтөө (орточо ± SD) катары көрсөтүлүп, эки топтун ортосундагы айырмачылыктарды аныктоо үчүн бир тараптуу кайталанган өлчөөлөр менен дисперсияны талдоо (ANOVA) аркылуу талданды. P < 0,05 статистикалык жактан маанилүү деп эсептелген.
Ошентип, омуртка денесине аутологиялык NPлерди имплантациялоо жана макроанатомиялык байкоо жүргүзүү, МРТ анализин, гистологиялык баалоону жана молекулярдык биологиялык анализди жүргүзүү аркылуу MCнин жаныбарлар моделин түзүү адамдын MC механизмдерин баалоо жана түшүнүү, ошондой эле жаңы терапиялык кийлигишүүлөрдү иштеп чыгуу үчүн маанилүү курал болуп калышы мүмкүн.
Бул макаланы кантип шилтемелөө керек: Хан, К. жана башкалар. Модик өзгөрүүлөрүнүн жаныбарлардагы модели бел омурткасынын субхондралдык сөөгүнө аутологиялык пульпосус ядросун имплантациялоо аркылуу түзүлгөн. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Вайсгаупт, Д., Занетти, М., Ходлер, Дж. жана Бус, Н. Бел омурткасынын магниттик-резонанстык томографиясы: симптомсуз ыктыярчыларда диск грыжасы жана кармалышы, нерв тамырларынын кысылышы, учтук пластинканын аномалиялары жана фасет муунунун остеоартритинин таралышы. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS жана Leboeuf-Eed, K. Модик өзгөрүүлөрү жана алардын клиникалык табылгалар менен байланышы. European Spine Journal: Европалык омуртка коомунун, Европалык омуртка деформациясы коомунун жана Европалык моюн омурткасын изилдөө коомунун расмий басылмасы 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Куйсма, М. жана башкалар. Бел омурткасынын учтук пластинкаларындагы модикалык өзгөрүүлөр: орто жаштагы эркек жумушчуларда белдин оорушун жана радикулиттин таралышы жана байланышы. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
де Рус, А., Крессел, Х., Спритцер, К. жана Далинка, М. Бел омурткасынын дегенеративдик оорусунда жилик чучугунун акыркы пластинкага жакын өзгөрүшүнүн МРТсы. AJR. Америкалык радиология журналы 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Модик, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ жана Carter, JR Дегенеративдик диск оорусу: омуртка чучугунун өзгөрүүлөрүн МРТ менен баалоо. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Модик, MT, Масарик, TJ, Росс, JS жана Картер, JR Дегенеративдик диск оорусунун сүрөтүн тартуу. Радиология 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Йенсен, Т.С. жана башкалар. Жалпы калктын неоверебралдык учтук пластинкасынын (Modic) сигналынын өзгөрүшүнүн божомолдоочулары. Европалык омуртка журналы: Европалык омуртка коомунун, Европалык омуртка деформациясы коомунун жана Европалык моюн омурткасын изилдөө коомунун расмий басылмасы, 19-бөлүм, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Альберт, ХБ жана Манниш, К. Модиктин бел омурткасынын диск грыжасында пайда болгон өзгөрүүлөрү. Европалык омуртка журналы: Европалык омуртка коомунун, Европалык омуртка деформациясы коомунун жана Европалык моюн омурткасын изилдөө коомунун расмий басылмасы 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Керттула, Л., Луома, К., Вехмас, Т., Гронблад, М. жана Каапа, Э. Модиктин I типтеги өзгөрүүлөрү дисктин деформациялык дегенерациясынын тездик менен өнүгүшүн алдын ала айта алат: 1 жылдык проспективдүү изилдөө. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Ху, ЗЖ, Чжао, ФД, Фан, XQ жана Фан, СВ Модик өзгөрүүлөр: бел омурткасынын диск дегенерациясынын мүмкүн болгон себептери жана салымы. Медициналык гипотезалар 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Крок, ХВ Ички дисктин жарылышы. 50 жылдан ашык убакыттан бери дисктин пролапс көйгөйлөрү. Омуртка (Фила Па 1976) 11, 650–653 (1986).
Жарыяланган убактысы: 2024-жылдын 13-декабры